AAT CCK-8試劑盒用戶指南——精準(zhǔn)評(píng)估細(xì)胞增殖與活性的技術(shù)利器

——助力藥物篩選、腫瘤研究及細(xì)胞毒性分析

一、產(chǎn)品概述

AAT CCK-8試劑盒（Cell Counting Kit-8）是一款基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的細(xì)胞活性檢測試劑，專為科研人員設(shè)計(jì)，用于快速、靈敏地評(píng)估細(xì)胞增殖、毒性及藥物敏感性。該試劑盒通過檢測細(xì)胞線粒體脫氫酶活性，將WST-8還原為橙黃色甲臜（Formazan），其吸光度值（OD值）與活細(xì)胞數(shù)量成正比，廣泛應(yīng)用于藥物篩選、腫瘤研究、細(xì)胞毒性分析及生物因子活性檢測等領(lǐng)域。

核心參數(shù)：

• 貨號(hào)：AAT-CCK8-XX（具體貨號(hào)以實(shí)際產(chǎn)品為準(zhǔn)）

• 規(guī)格：100次檢測/盒（含WST-8溶液、稀釋緩沖液）

• 檢測波長：450 nm

• 靈敏度：可檢測100個(gè)活細(xì)胞/孔

• 適用細(xì)胞類型：貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、原代細(xì)胞及細(xì)胞系

二、技術(shù)優(yōu)勢

1. 高靈敏度與特異性

• 靈敏度：可檢測低至0.1%的細(xì)胞增殖變化，優(yōu)于傳統(tǒng)MTT法。

• 特異性：僅對(duì)活細(xì)胞脫氫酶活性響應(yīng)，不受死細(xì)胞或非細(xì)胞成分干擾。

2. 操作簡便與高效

• 流程簡化：無需洗滌、離心或有機(jī)溶劑提取，直接向培養(yǎng)板中加入CCK-8試劑即可。

• 時(shí)間節(jié)省：孵育時(shí)間僅需1-4小時(shí)，顯著縮短實(shí)驗(yàn)周期。

3. 多場景應(yīng)用

• 藥物篩選：快速評(píng)估候選藥物的細(xì)胞毒性及抗增殖效果。

• 腫瘤研究：檢測腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性及耐藥性。

• 細(xì)胞毒性分析：評(píng)估環(huán)境污染物、化學(xué)物質(zhì)或納米材料對(duì)細(xì)胞的毒性作用。

4. 高兼容性

• 培養(yǎng)基兼容性：適用于含酚紅、血清或抗生素的培養(yǎng)基。

• 儀器兼容性：適用于酶標(biāo)儀、多功能微孔板檢測儀等。

三、操作指南

（一）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1. 試劑與耗材

• AAT CCK-8試劑盒（含WST-8溶液、稀釋緩沖液）

• 96孔或384孔細(xì)胞培養(yǎng)板

• 酶標(biāo)儀（配備450 nm濾光片）

• 細(xì)胞培養(yǎng)基、PBS、胰蛋白酶等

2. 細(xì)胞準(zhǔn)備

• 細(xì)胞接種：將細(xì)胞按5,000-10,000個(gè)/孔接種于96孔板中，每孔100 μL培養(yǎng)基。

• 預(yù)培養(yǎng)：37℃、5% CO?條件下培養(yǎng)24小時(shí)，使細(xì)胞貼壁。

（二）實(shí)驗(yàn)操作

1. 藥物處理（如需）

• 加入不同濃度的待測藥物，繼續(xù)培養(yǎng)24-72小時(shí)。

2. CCK-8試劑添加

• 每孔加入10 μL CCK-8試劑（避免產(chǎn)生氣泡）。

• 輕輕搖勻培養(yǎng)板，37℃孵育1-4小時(shí)（孵育時(shí)間根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整）。

3. 吸光度檢測

• 使用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定各孔OD值。

• 數(shù)據(jù)記錄：記錄實(shí)驗(yàn)孔（含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8及藥物）、對(duì)照孔（含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8）及空白孔（僅含培養(yǎng)基、CCK-8）的OD值。

（三）數(shù)據(jù)分析

1. 細(xì)胞活性計(jì)算

• 細(xì)胞存活率 = (實(shí)驗(yàn)孔OD值 - 空白孔OD值) / (對(duì)照孔OD值 - 空白孔OD值) × 100%

• 細(xì)胞抑制率 = 1 - 細(xì)胞存活率

2. IC??值計(jì)算

• 使用GraphPad Prism或SPSS軟件繪制藥物濃度-抑制率曲線，計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC??）。

四、使用技巧與高效操作

1. 樣本優(yōu)化

• 細(xì)胞密度：避免細(xì)胞過密導(dǎo)致接觸抑制，建議每孔細(xì)胞數(shù)不超過10,000個(gè)。

• 孵育時(shí)間：白細(xì)胞或懸浮細(xì)胞需延長孵育時(shí)間至4小時(shí)，或增加細(xì)胞數(shù)量。

2. 試劑保存

• CCK-8試劑需避光保存于4℃，開封后建議2個(gè)月內(nèi)使用。

3. 實(shí)驗(yàn)對(duì)照

• 空白對(duì)照：僅含培養(yǎng)基和CCK-8試劑，用于扣除背景信號(hào)。

• 對(duì)照孔：含細(xì)胞、培養(yǎng)基和CCK-8試劑，用于標(biāo)準(zhǔn)化OD值。

4. 干擾因素排除

• 酚紅影響：酚紅培養(yǎng)基不影響檢測結(jié)果，無需額外處理。

• 藥物干擾：若藥物本身在450 nm處有吸收，需更換培養(yǎng)基后重新檢測。

五、注意事項(xiàng)

1. 安全規(guī)范

• 操作時(shí)佩戴手套與口罩，避免試劑接觸皮膚或吸入。

• 廢棄物需按生物安全等級(jí)處理。

2. 操作細(xì)節(jié)

• 移液精度：使用校準(zhǔn)后的移液器，誤差<±1%。

• 孵育溫度：嚴(yán)格控制在37℃，避免溫度波動(dòng)影響結(jié)果。

3. 故障排除

• OD值偏低：檢查細(xì)胞狀態(tài)、CCK-8試劑是否失效或孵育時(shí)間不足。

• 背景信號(hào)高：確保空白孔無細(xì)胞污染，或縮短孵育時(shí)間